免疫组化，即免疫组织化学检测，是病理诊断中一种常用的检测手段。即对送检的标本，进行切片、染色，进而根据显色，确定组织细胞内的抗原，对其进行定位、定性及定量的研究。对肿瘤的鉴别诊断、类型判断，甚至对后续治疗都有帮助。 免疫组化为何需要一定时间，在此我们简单讲讲免疫组化的步骤。

　　载玻片准备:将载玻片置于重铬酸钾和浓H2SO4 混合液中 , 然后置于清水中清洗 , 除去残余的重铬酸钾和浓 H2SO4, 再将载玻片浸泡于酒精之中 , 然后取出 , 置于37°C温箱中，将多聚赖氨酸涂布于玻片的表面，由于 Lys 带正电，而大多数的组织带负电荷，从而产生吸附作用。

　　蜡块制作:在铁模具中加入一些液态石蜡，冷却，然后再将待包埋的组织置于石蜡之中，并排列整齐，盖上模具盒盖，最后加入少许液体石蜡，进行冷冻，成为蜡块。

　　石蜡切片:将制作好的蜡块用刀片修成规整的形状，以少许热蜡液将其底部迅速贴附于小木块上，夹在蜡快切片机的蜡块钳内，使蜡块切面与切片刀刃平行，旋紧。通常切片厚度为 4 ~ 7 微米，切出一片接一片的蜡带，用毛笔轻托轻放在纸上

　　贴片与烤片:在洁净的载玻片上涂抹薄层蛋白甘油(有粘附作用)，将展平的蜡片牢附于载玻片上，用滤纸吸除多余水分，放入45°C温箱中干燥。

　　脱蜡:干燥后的切片需脱蜡及水化才能在水溶性染液中进行染色。用二甲苯脱蜡，再逐级浸泡于纯酒精及梯度酒精直至蒸馏水中。

　　抗原修复:脱蜡后在清水中冲洗一段时间，加入 3%H2O2 浸泡 10 min，在清水中清洗两次，加入柠檬酸缓冲液，放入微波炉中蒸煮，沸腾后冷却至室温，再蒸煮并冷却至室温，目的是为了暴露抗原的位点。

　　血清封闭:冷却至室温后，将柠檬酸缓冲液倒掉，水洗 2 次，并将载玻片置于PBS 缓冲液中 5 min，洗 2 次，擦干组织周围的 PBS 液，马上加上血清，使一些非特异性的位点封闭起来，然后放入 37°C温箱中半小时。(这个步骤是为了降低假阳性的概率)

　　加一抗:将温箱中的载玻片取出，用吸水纸擦干载玻片反面和正面组织周围的血清，加一抗，如果做对照实验，就在对照的组织上加 PBS。加完一抗后于4°C冰箱中保存过夜。

　　加二抗:将载玻片从冰箱中取出，放入 PBS 中洗 3 次，每次 5 min，擦干组织周围的 PBS 后加上二抗 , 然后置于 37°C温箱中半小时。

　　SABC 染 色:将片子从温箱中取出,放入PBS液中洗3次，每次5 min，擦干组织周围的 PBS 液

　　加显色剂:将片子从温箱中取出 ,放入 PBS 中洗 3 次，每次 5 min，擦干组织周围的 PBS 后加上显色剂

　　复染:将显色后的片子用清水冲洗一 段时间后，浸泡于苏木精中染色

　　脱水:将复染后的片子置于水中冲洗后，依次将载玻片放入浓度不同的酒精和二甲苯，每个试剂中放置 2 min，最后浸泡在二甲苯中，搬到通风柜中。

　　封片:用中性树胶滴在组织旁边，再用盖玻片盖上，要先放平一侧，然后轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好片子后置于通风柜中晾干。